labbioreagents REK-01-1215說(shuō)明書

利妥昔單抗 （美羅華®）（人）ELISA試劑盒

Rituximab (Mabthera)

(Human) ELISA Kit

目錄號(hào)：REK-01-1215規(guī)格：1板（96孔）

版本：02

僅供研究使用

一般描述

利妥昔單抗ELISA試劑盒是一種夾心酶聯(lián)免疫分析法，用于定量測(cè)定血清和血漿中的利妥昔單抗，具有較高的靈敏度和特異性。

試劑盒性能

· 靈敏度：10 ng/mL

· 分析范圍：10-250 ng/mL

· 交叉反應(yīng)：與天然血清免疫球蛋白無(wú)交叉反應(yīng)

· 回收率：已知濃度的正常人血清樣品為80-120%。

· 精密度

（CV(%)= SD/平均值×100）

Ø 批內(nèi)：CV < 20%

Ø 批間：CV < 20%

提供的材料

組件列表

儲(chǔ)存說(shuō)明

從運(yùn)輸之日起，整個(gè)試劑盒可在4 ℃下儲(chǔ)存長(zhǎng)達(dá)12個(gè)月。

試驗(yàn)方案

分析前，使所有試劑、微孔板和樣品恢復(fù)至室溫。

1. 使用平板包被緩沖液將捕獲抗體（未結(jié)合的抗利妥昔單抗抗體）稀釋10倍。用50µL/孔制備的捕獲抗體包被96孔板，并在4 ℃下孵育過(guò)夜，同時(shí)振搖。

2. 用0.05%PBST洗板5次（5次）。

3. 向各孔中加入100µL封閉緩沖液，封閉平板，并在室溫下孵育1小時(shí)。

4. 用0.05%PBST洗板5次（5次）。

• 用試驗(yàn)稀釋劑稀釋利妥昔單抗預(yù)加標(biāo)血清或血漿，制備標(biāo)準(zhǔn)品(10–250 ng/mL)。向適當(dāng)孔中加入50µL標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品和稀釋樣品。蓋上微孔板，在室溫下孵育1小時(shí)。

6. 用0.05%PBST洗板5次（5次）。

• 用試驗(yàn)稀釋劑將檢測(cè)抗體（生物素偶聯(lián)抗利妥昔單抗檢測(cè)抗體）稀釋10倍。向各孔中加入50µL制備的檢測(cè)抗體溶液，并在室溫下孵育1小時(shí)。

8. 用0.05%PBST洗板5次（5次）。

9. 加入100µL鏈霉親和素(HRP)，并在室溫下于暗處孵育平板30 min。

10. 用0.05%PBST洗板5次（5次）。

11. 加入100µL TMB底物溶液，并將平板在室溫下避光孵育20 min。

12. 加入100µL終止液終止反應(yīng)。

13. 在20 min內(nèi)，在酶標(biāo)儀中讀取設(shè)定為450 nm的吸光度（參考波長(zhǎng)為650 nm）。

技術(shù)提示

· 使用前將試劑恢復(fù)至室溫

· 不同批次的試劑在使用時(shí)不得混合。

· 避免樣本和試劑之間的任何污染。

· TMB保持無(wú)色直至加入平板。TMB避光保存。

• 加入終止液后，孔中的顯色顏色將立即從藍(lán)色變?yōu)辄S色。顯示綠色的孔表示終止液和TMB未充分混合。
• 繪制各標(biāo)準(zhǔn)品的OD450/650 nm作為Y軸，對(duì)應(yīng)利妥昔單抗?jié)舛茸鳛閄軸，構(gòu)建四參數(shù)邏輯(4 pL)標(biāo)準(zhǔn)曲線。在OD450/650 nm與利妥昔單抗?jié)舛炔荒芎芎闷ヅ涞那闆r下，請(qǐng)使用五參數(shù)邏輯(5 pL)或具有適當(dāng)加權(quán)因子的點(diǎn)對(duì)點(diǎn)生成標(biāo)準(zhǔn)曲線。

安全要求

· 處理試劑和樣本時(shí)，穿戴適當(dāng)?shù)腜PE（例如手套、實(shí)驗(yàn)室工作服）。

• 本試劑盒含有人源性組分。發(fā)現(xiàn)這些材料對(duì)HBsAg、HCV抗體以及HIV 1/2抗原和抗體無(wú)反應(yīng)性。然而，這些材料應(yīng)被視為具有潛在傳染性，因?yàn)闆](méi)有試驗(yàn)可以保證*沒(méi)有傳染性因子。
• 避免直接接觸TMB和終止液，這可能會(huì)引起皮膚/眼睛刺激。如果與終止液和底物溶液接觸，請(qǐng)用水*清洗皮膚/眼睛，并在必要時(shí)就醫(yī)。

· 根據(jù)適用的國(guó)家法規(guī)要求處置消耗材料和未使用的內(nèi)容物。

平板布局