上海起發現貨progen PRAAV2R說明書

AAV2 Titration ELISA 2.0R

主要特征

ELISA原理：

該測定基于夾心 ELISA 技術，其中對組裝的 AAV 衣殼上的構象表位具有特異性的重組抗體包被到板上，用于從樣本中捕獲 AAV 顆粒。

捕獲的 AAV 粒子的檢測是一個兩步過程。

1. 生物素偶聯的重組抗體與捕獲的 AAV 顆粒結合。

2. 鏈霉親和素過氧化物酶偶聯物與生物素分子反應。添加底物會導致顏色反應，該反應與特異性結合的病毒顆粒的量成正比。

AAV 量化方法的比較：

每種常用的量化方法都有其優缺點：

• qPCR被廣泛使用，但存在一些問題，例如樣品制備、引物設計或 PCR 效率，這些問題會導致實驗室間結果的高度差異。

• 數字液滴 PCR方法克服了 qPCR 的一些局限性。然而，由于不同的樣品處理協議，實驗室之間的差異仍然可能發生。

• 如果使用可靠的參考材料，斑點印跡是一種簡單且定量的方法。然而，它通常受到蛋白質印跡的有限線性和動態范圍的影響。

鑒于上述技術的實際缺點，傳統的夾心 ELISA 目前在實驗室間和實驗室內的變化以及易用性方面似乎更勝。因此，它代表了可靠和可重復量化總 rAVV 衣殼滴度的最佳格式。

使用 shuffled/mutated AAV：

改組/突變 AAV 載體的識別取決于受改組/突變影響的特定衣殼區域。用于 PROGEN 的 AAV ELISA 的捕獲抗體結合特定的，在某些情況下，結合明確的構象表位。這些表位由相應 AAV 血清型的衣殼組裝產生。ELISA 可能識別您的改組/突變 AAV 載體的第一個跡象是抗體結合表位的存在。然而，衣殼蛋白的蛋白質序列的變化也可能影響蛋白質的構象，因此 AAV 衣殼上呈現的表位的構象。這可能會影響抗體的結合親和力，并影響基于 AAV ELISA 試劑盒提供的（非改組）試劑盒對照的滴度確定。由于這些屬性在很大程度上取決于執行的特定改組/突變，因此 PROGEN 無法保證對改組/突變的 AAV 載體進行成功和精確的量化。即使抗體結合表位仍然存在于您改組/突變的 AAV 衣殼上，您的檢測也需要針對您的特定 AAV 載體進行測試和優化。

PROGEN 強烈建議生產和校準合適的（改組/突變）試劑盒對照，以確保使用 PROGEN ELISA 試劑盒對您單獨改組/突變的 AAV 載體進行可靠的滴度測定。

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